胚胎干细胞显微注射对小鼠和猪胚胎发育影响的研究

摘要：

旨在为小鼠和猪多能性干细胞嵌合体制作提供参考,探讨胚胎干细胞(Embryonic stem cells或Embryonic germ cells,ES/EG)显微注射及受体胚胎发育时期等对胚胎发育的影响.对小鼠ES细胞和猪EG细胞分别进行研究:(1)将小鼠ES细胞分别注入小鼠桑椹胚和囊胚,比较不同发育时期受体胚胎体外培养的发育率和孵化率,以及注射胚胎和未注射胚胎体外培养的发育率和孵化率.结果表明,显微注射后的桑椹胚体外培养发育率和孵化率分别为94.7％和70.2％,囊胚率分别为84.6％和80.8％,注射后桑椹胚体外培养发育率极显著高于囊胚(P＜0.01),但注射后囊胚体外培养孵化率极显著高于桑椹胚(P＜0.01);未注射胚胎(注射胚胎)的体外培养发育率和孵化率分别为96.6％ (89.9％)和67.8％(75.2％),未注射胚胎发育率极显著高于注射胚胎(P＜0.01),但注射胚胎孵化率极显著高于未注射胚胎(P＜0.01).(2)将猪EG细胞分别注入猪桑椹胚、早囊、囊胚及孵化囊胚,比较不同发育时期受体胚胎移植后妊娠率以及注射胚胎和未注射胚胎体外培养的孵化率,并对猪EG细胞显微注射针和固定针的规格进行了探讨.结果表明,显微注射的桑椹胚、早囊及囊胚移植后妊娠率为67％,而显微注射的孵化囊胚移植妊娠率为0,桑椹胚、早囊及囊胚移植后受体母猪妊娠率极显著高于孵化囊胚(P＜0.01),由桑椹胚、早囊及囊胚注射后移植获得了两头嵌合体仔猪;显微注射和未显微注射的猪胚胎其孵化率分别为47.54％和72.97％,未注射胚胎孵化率极显著高于注射胚胎(P＜0.01).确定猪EG嵌合体制作过程中,注射针外径约为30 μm,内径约为25 μm;固定针外直径约为130～150 μm,内径约为40 μm.嵌合体制作时,胚龄宜早不宜迟,桑椹胚显微注射更易操作,而且导入的时期较早,ES/EG细胞在嵌合体组织中可以有很高的贡献率,故选择桑椹胚进行注射.在本试验条件下,显微注射对小鼠胚胎发育影响不大,对猪胚胎影响较大,说明猪胚胎显微注射条件需要进一步优化.

关键词：胚胎干细胞、嵌合体、显微注射

所属期刊栏目：46

分类号：Q28(细胞生物学)

资助基金：山东省"泰山学者海外特聘专家"启动经费6631111314;山东省自然基金2014年面上项目ZR2014CM011

在线出版日期：2016-09-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1784-1790