靶向猪ATGL基因的miRNA预测及鉴定

摘要：

本试验旨在初步筛选出调控猪脂肪甘油三酯脂肪酶基因(ATGL)的miRNA.利用生物信息学分析预测10条靶向ATGL基因的猪miRNAs,然后通过装载含猪ATGL基因3'UTR序列来构建pMIR-Luc报告基因载体,以及通过装载含反向miRNA种子区对应的3'UTR序列来构建3个突变载体作为阴性对照,以pRL-TK载体作为内参,与候选miRNA模拟物共转染HEK 293T细胞,最终利用双荧光素酶报告基因法来检测荧光素酶活性.试验成功构建了含猪ATGL基因3'UTR序列的重组载体pMIR-A TGL-3' UTR,双荧光素酶报告基因试验显示ssc-miR-769-3p、ssc-miR-1343、ssc-miR-7137-3p、ssc-miR-671-5p、ssc-miR-149能下调293T细胞中pMIR-ATGL-3'UTR的荧光素酶活性,而点突变试验证实了ssc-miR-1343与ssc-miR-7137-3p能通过与猪ATGL基因3'UTR上预测的种子区结合下调荧光素酶活性.结果表明,sc-miR-1343与ssc-miR-7137-3p通过靶向结合3'UTR对猪ATGL基因有下调作用.

关键词：猪、ATGL基因、miRNA、双荧光素酶报告基因系统、3’UTR

所属期刊栏目：46

分类号：S828.2(家畜)

资助基金：国家自然科学基金31201783;“十二五”农村领域国家科技计划课题2011AA100304-1;浙江省自然基金Y3100569;浙江省育种专项2012C12906-5

在线出版日期：2016-09-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：1281-1289