牛囊胚ICM克隆多能性标记基因与表面标记的研究

摘要：

本研究旨在探究牛类胚胎干细胞(Embryonic stem cells,ES)的多能性标记基因与表面标记,为优化牛类ES细胞培养条件和相关研究提供依据.利用2i/LIF培养液,通过全胚接种及机械传代法分离培养牛囊胚内细胞团(Inner cell mass,ICM),免疫荧光染色法检测其多能性标记基因与表面标记;qRT-PCR检测免疫磁珠法分选的牛囊胚ICM和滋养层细胞(Trophectoderm cell,TE)的多能性标记基因的差异表达结果.试验成功分离出了牛囊胚ICM克隆,并体外培养至第10代,且各代克隆均呈现出了典型的干细胞形态.结果表明,ICM表面标记SSEA1、SSEA4和TRA-1-60染色为阳性,且多能性标记基因OCT4、SOX2和NANOG在其中均有表达;OCT4、SOX2和NANOG在牛囊胚ICM和TE中的表达存在差异(P＜0.05),其中SOX2的差异极显著(P＜0.01).综上表明,2i/LIF培养液有助于牛囊胚ICM的培养;SOX2可能成为牛ICM克隆的候选多能性标记基因.

关键词：牛、ICM、多能性标记、qRT-PCR

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分类号：S823.2(家畜)

资助基金：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所家畜胚胎工程与繁殖创新团队ASTIP-IAS06-2014;中央级公益性科研院所基本科研业务费专项2014ywf-yb-2

在线出版日期：2016-09-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：1141-1149