10.11843/j.issn.0366-6964.2015.06.025
双峰驼天然重链抗体可变区酵母双杂交文库的构建与鉴定
构建双峰驼天然重链抗体可变区(VHH)酵母双杂交文库,并对文库质量进行鉴定.采集未经免疫的6月龄雌性双峰驼外周血、骨髓、脾和淋巴结,并从外周血中分离淋巴细胞.抽提总RNA,反转录为cDNA,用2对引物经过2轮PCR扩增得到400 bp左右的双峰驼VHH片段.根据Clontech公司Mate&PlateTM library construction system使用手册,将带有同源臂的VHH片段与线性化的pGADT7-Rec质粒共转化Y187酵母感受态细胞,转化产物涂布SD/-Leu平板,30℃倒置培养3~5 d后,收集平板上的所有克隆,即为双峰驼天然重链抗体可变区酵母双杂交文库.对文库的滴度、重组效率及多样性进行鉴定.结果显示,本研究构建的双峰驼天然重链抗体可变区酵母双杂交文库库容为2.07×107,滴度为7.6×108 cfu·mL-1.随机挑取47个独立克隆进行菌落PCR鉴定,43个含有VHH片段,重组率为91.5%;选取其中19个测序,均为独立克隆,且多样性好.该研究成功构建双峰驼天然重链抗体可变区酵母双杂交文库,且文库质量满足要求,为进一步获得特定抗原的VHH奠定了基础.
双峰驼、重链抗体可变区、酵母双杂交
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Q789(基因工程(遗传工程))
国家自然科学基金31272578;西北农林科技大学引进人才科研启动基金Z111021006
2016-09-18(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
共6页
1071-1076