绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA方法的初步建立

摘要：

为制备抗绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)囊膜蛋白(ENV)胞质尾区(CT)的单克隆抗体,利用生物信息学分析JSRV囊膜蛋白氨基酸序列,根据分析结果合成多肽,将此多肽分别连接钥孔血蓝蛋白(CT-KLH)和牛血清白蛋白(CT BSA),用CT-KLH作为抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合.建立间接ELISA方法筛选分泌抗CT蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,获得1株能稳定分泌抗CT蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为8E5,亚类为IgG2a/κ.间接ELISA检测培养上清效价为6.4×103,腹水效价为1×10 5.Western blot及免疫组化结果显示,这株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体能识别JSRV抗原,与其发生特异性反应.试验结果证明,单抗8E5是绵羊肺腺瘤的重要诊断试剂.应用8E5细胞株分泌的单克隆抗体建立JSRV-ENV的双抗体夹心ELISA检测方法,该ELISA检测方法特异性、重复性和敏感性良好,为快速检测诊断绵羊肺腺瘤和研究囊膜蛋白功能奠定了基础.

关键词：绵羊肺腺瘤病毒、囊膜蛋白、B细胞表位、单克隆抗体、ELISA

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分类号：S852.659.3(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金31160493,31360597;内蒙古科技创新引导基金项目20130224;教育部博士点基金博导类项目20111515110008

在线出版日期：2016-09-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：800-807