转内切葡聚糖酶基因罗伊乳酸杆菌的构建及其肉鸡饲喂效果验证

摘要：

本研究旨在构建可胞外分泌内切葡聚糖酶,且具有降解β-葡聚糖能力的转内切葡聚糖酶基因罗伊乳酸杆菌,并对其进行肉鸡饲喂效果验证,为后续转基因乳酸杆菌在动物生产中的应用奠定基础.采用PCR和酶切连接方法构建pLEM4157(cel)载体,转化Lactobacillus.reuteri XC1感受态细胞,进行聚丙烯胺凝胶电泳表达谱分析和内切葡聚糖酶活性测定,同时测定其肉鸡饲喂效果.结果表明,克隆的内切葡聚糖酶基因大小为1 500 bp,经测序比对,与已报道基因序列相似性为99％,氨基酸序列相似性为100％;Native-PAGE和SDS-PAGE分析结果表明,内切葡聚糖酶基因celW成熟肽在罗伊乳酸杆菌的蛋白分子量均为52 ku左右,与理论计算值相符;L.reuteri pLEM4157(cel)培养上清和胞内上清内切葡聚糖酶活性分别为(0.96±0.08)和(0.37±0.09)U·mL-1;L.reuteri pLEM4157(cel)对肉仔鸡生长性能无显著影响,但可显著降低21日龄肉仔鸡十二指肠、空肠pH,促进21日龄肉仔鸡肾、法氏囊、胸腺和胰腺的生长发育,增加42日龄肉仔鸡的胸腺和胰腺指数,提高肉仔鸡21日龄血清白球比、钙、磷含量和42日龄血清葡萄糖含量.L.reuteri pLEM4157(cel)成功分泌表达了内切葡聚糖酶,具有降解羧甲基纤维素的能力和一定的肉鸡饲喂效果.

关键词：转基因、内切葡聚糖酶基因、罗伊乳酸杆菌、饲喂效果、肉鸡

所属期刊栏目：46

分类号：S831;S815.5(家禽)

资助基金：国家自然科学基金资助项目cyh200803;国家公益性行业农业专项20090300606

在线出版日期：2016-09-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：774-783