猪带绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶的原核表达及其生物学特性分析

摘要：

猪带绦虫(Ts)是一种重要的人畜共患寄生虫,硫氧还蛋白过氧化物酶(TPx)是猪带绦虫及其幼虫重要的功能蛋白.为研究TsTPx蛋白的功能和筛选猪囊虫高效免疫靶标,提取猪带绦虫成虫总RNA,经RT-PCR扩增tstpx基因,测序分析后构建原核表达载体pET-30a(+)-tstpx,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,用镍离子亲和层析纯化TsTPx蛋白并进行生物学特性分析,包括抗氧化功能和抗原性.结果如下:SDS-PAGE分析表明,表达的TsTPx蛋白约25 ku,主要以可溶性形式存在于菌体裂解上清中.抗氧化功能分析表明,在金属催化氧化(MCO)体系中,TsTPx蛋白对质粒DNA超螺旋结构的保护率与质量浓度呈正相关,20 μg·mL-1时可100％保护,电泳图谱中被氧化的开环慢迁移带完全消失;H2O2还原体系中,TsTPx蛋白对H2O2的还原率与质量浓度呈正相关,100 μg·mL-1时,在含二硫苏糖醇(DTT)体系中,还原率达69.9％,在不含DTT体系中为54.5％.抗原性分析:Western blotting显示TsTPx蛋白可被猪带绦虫囊尾蚴阶段阳性血清识别,具有良好的反应原性;用TsT-Px蛋白免疫家兔,间接ELISA检测的抗体效价高达1∶320 000,具有良好的免疫原性.本研究表达的TsTPx蛋白具有生物学活性和良好的抗原性,为进一步阐明其生物学功能和研制猪囊虫病疫苗奠定了基础.

关键词：猪带绦虫、硫氧还蛋白过氧化物酶、原核表达、生物学特性分析

所属期刊栏目：45

分类号：S852.734(动物医学（兽医学）)

资助基金：甘肃省创新研究群体计划项目1210RJIA006;甘肃农业大学伏羲杰出人才项目

在线出版日期：2016-09-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1512-1517