羊口疮病毒ORF125基因编码蛋白的结构预测及其在真核表达质粒转染细胞中的定位

摘要：

旨在预测羊口疮病毒(ORFV)ORF125蛋白结构及其在真核表达质粒转染细胞中的定位.设计引物PCR扩增ORF125基因,并将其定向克隆至pEGFP-N1真核表达载体,经酶切鉴定及序列测定后得到阳性重组表达质粒pEGFP-ORF125.利用DNAStar和MEGA4.0元件分析不同毒株间ORF125基因的遗传进化关系,接着通过在线Expasy工具预测其二级结构并与Bcl 2家族成员进行比较.利用脂质体介导法转染山羊皮肤成纤维细胞(GSFs),经DAPI染色后在激光共聚焦显微镜下观察ORF125的亚细胞定位.结果显示:本次克隆的ORFV ORF125基因与国外公布的其他羊口疮毒株核苷酸水平相似性为97.1％～98.1％,与同属另外2株羊伪牛痘病毒相比,核苷酸相似性分别为84.1％(GQ329669)和85.6％(GQ329670);蛋白二级结构预测分析发现ORF125与Bcl-2家族成员α-螺旋位置相近,预测空间结构有很大的相似性;激光共聚焦显微镜观察发现ORF125在GSFs细胞质中呈弥散性分布.结果提示,羊口疮病毒ORF125基因非常保守,预测与Bcl 2蛋白有着相似的功能,重组质粒pEGFP-ORF125构建成功,ORF125基因在GSFs中得到表达,定位于细胞质中.

关键词：羊口疮病毒、ORF125序列分析、亚细胞定位、基因结构

所属期刊栏目：45

分类号：S852.659.1(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金NSFC-31201914;家畜疫病病原生物学国家重点实验室开放课题SKLVEB2012KFKT009;国家现代肉羊产业技术体系CARS-39

在线出版日期：2016-09-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1375-1380