鸡传染性喉气管炎病毒gC蛋白的多抗制备、细胞定位及功能研究

摘要：

为制备对鸡传染性喉气管炎具有诊断应用价值的抗体,并研究鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV) gC蛋白在LMH细胞内的分布及gC蛋白对病毒在细胞间传播过程中的作用,本研究以ILTV-LJS09毒株基因组为模板,应用PCR方法扩增gC基因的主要抗原性片段,并克隆至原核表达载体pET-32a(+)构建pET-32a-gC质粒,经IPTG诱导表达并纯化,获得His gC重组蛋白,免疫新西兰大白兔制备抗血清.Western blot结果表明,所制备的兔抗-ILTV gC抗体能与纯化的His-gC蛋白发生特异性反应且能检测到内源性gC蛋白.间接免疫荧光试验结果表明,所制备的兔抗ILTV-LJS09 gC蛋白的多抗能与ILTV LJS09、HLJ0507、MDJ0442、SD0203、Zhj1298毒株反应,特异性良好.采用获得的抗gC抗体观测LJS09-gC蛋白在LMH细胞内的分布,发现gC蛋白主要存在于病毒感染细胞的胞质和胞膜上,细胞核和未感染的细胞中没有gC蛋白.利用抗体中和ILTV gC蛋白的试验结果表明,gC蛋白可能直接参与病毒在细胞间传播,从而影响病毒蚀斑的形成.本研究成功制备了具有诊断价值的兔抗ILTV-LJS09 gC蛋白的多克隆抗体,并证实LJS09 gC蛋白在分布及功能上具有α疱疹病毒的保守性,为gC蛋白生物学特性和ILTV感染机制的研究提供了重要数据.

关键词：ILTV、gC蛋白、多克隆抗体、细胞定位、功能

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分类号：S852.659.1(动物医学（兽医学）)

资助基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费项目0302012009;国家自然科学基金青年基金31302092

在线出版日期：2016-09-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：1309-1316