pEGFP-hTERT转染鸡胚胎干细胞建系的研究

摘要：

本研究旨在通过构建重组质粒pEGFP-hTERT转染鸡胚胎干细胞(Chicken embryonic stem cells,cESCs),优化鸡胚胎干细胞培养体系,以期构建鸡胚胎干细胞株或细胞系.在获得hTERT基因后,构建重组质粒pEGFP-hTERT,并利用FuGENE(@)HD转染鸡成纤维细胞(DF-1),转染24 h后,荧光显微镜检测;再以80％BRL-CM(大鼠肝细胞条件培养基)与20％的ES基础培养液混合的条件培养基培养分离的cESCs,添加10 μmol·L 1维生素C,AKP染色以及相关表面抗原SSEA-1、SOX2和OCT4检测鉴定后,以G418筛选pEGFP-hTERT转染的cESCs,传代培养后荧光定量PCR检测相关干性基因的表达水平.结果表明:维生素C可以促进cESCs增殖,pEGFP-hTERT转染的DF 1细胞中可以检测到绿色荧光表达,pEGFP-hTERT转染的cESCs可持续传至10代以上,且仍保持未分化状态,干细胞表面特异性抗原检测呈阳性,且相关干性基因的表达水平差异不显著(P＞o.05).综上表明:pEGFP-hTERT转染的cESCs在80％ BRL CM结合外源因子的作用下,能够持续稳定传至10代且仍保持未分化状态,可应用于鸡胚胎干细胞的永生化和细胞系建立.

关键词：pEGFP-hTERT、hTERT基因、BRL-CM、鸡胚胎干细胞

所属期刊栏目：45

分类号：S831;S814.8(家禽)

资助基金：国家自然科学基金31272429,31301959;江苏省研究生培养创新工程CXLX12_0934

在线出版日期：2016-09-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1253-1259