绵羊ApoER2基因克隆及其干扰质粒对睾丸共培养细胞硒蛋白表达的影响

摘要：

本研究旨在克隆绵羊ApoER2基因,构建ApoER2-siRNA质粒载体,研究ApoER2基因沉默对睾丸共培养细胞Sel P和PHGPx表达的影响.利用RT-PCR技术,克隆ApoER2序列,在此基础上构建4种pGPU6/GFP/Neo-ApoER2-siRNA质粒表达载体,利用脂质体将其转染到体外共培养绵羊睾丸细胞中,采用Real-time PCR和Western blotting方法,检测其抑制效应,并研究ApoER2基因沉默对Sel P和PHGPx mRNA表达的影响.本研究成功获得了长度为2 490 bp的绵羊睾丸ApoER2完整编码区序列,共编码892个氨基酸,绵羊ApoER2核苷酸序列与牛的同源性最高,相似性为97.7％.ApoER2-siRNA-1565和ApoER2-siRNA-2567位点重组质粒的干扰效果较好(P＜0.01),选取ApoER2 siRNA 2567重组质粒,结果显示转染组Sel P和PHGPx表达量显著降低(P＜0.01).获得了绵羊ApoER2编码区序列和有效抑制该基因表达的2个质粒载体,ApoER2沉默可能影响了睾丸硒蛋白Sel P和PHGPx的表达,为进一步研究ApoER2转运硒机理提供了理论依据.

关键词：ApoER 2克隆、siRNA质粒载体、睾丸共培养细胞、硒蛋白表达、绵羊

所属期刊栏目：45

分类号：S826;Q786(家畜)

资助基金：高等学校博士学科点专项科研基金20091403120001

在线出版日期：2016-09-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：1237-1245