山羊不同组织及不同发育时期骨骼肌内参基因的表达稳定性分析

摘要：

为筛选出山羊不同组织、不同时期骨骼肌及骨骼肌卫星细胞(Skeletal muscle satellite cells,SMSCs)中稳定表达的内参基因,以出生后3日龄的山羊不同组织(心、肝、脾、肺、肾、大脑、大肠、小肠、背最长肌、臂三头肌和半膜肌)和不同时期(3、30、60、90和120 d)的3种骨骼肌(背最长肌、臂三头肌和半膜肌)以及培养至不同阶段(1、3、4和7 d)的山羊SMSCs为研究对象,运用qRT-PCR技术及geNorm分析软件,探索9个内参基因(ACTIN、GAPDH、TOP2β、YWHAZ、SDHA、PGK1、RP2、RPL4和HPRT1)mRNA的表达稳定性.结果表明,在同一时期的11个组织中,内参基因表达稳定度的排序:HPRT1＞ RP2＞TOP2β＞SDHA＞ GAPDH＞ACTIN＞ YWHAZ＞PGK1＞RPL4,需要2个内参基因(HPR T1和RP2)共同校正目的基因的表达;在不同发育时期的骨骼肌中,各内参的稳定度:YWHAZ＞ACTIN＞ HPRT1＞RPL4＞TOP2β＞SDHA＞PGK1＞GAPDH＞RP2,需引入3个内参(YWHAZ、ACTIN和HPRT1)才能准确地校正定量结果;在SMSCs中各内参表达的稳定度排序:PGK1＞SDHA＞ACTIN＞RPL4＞ GAPDH＞ TOP2β＞YWHAZ＞RP2＞ HPRT1,需要3个合适的内参(PGK1、SDHA和ACTIN)作为标准化指标校正定量数据.本试验分别筛选出了能在山羊同一时期不同组织、不同发育时期的骨骼肌及SMSCs中稳定表达的内参基因及需要引入的内参数目,有利于更加准确地校正基因mRNA水平的表达量,为更好地研究基因功能奠定了基础.

关键词：山羊、荧光定量PCR、内参基因、表达稳定性

所属期刊栏目：45

分类号：S827;Q786(家畜)

资助基金：四川省科技支撑计划2011NZ0099-36;国家星火计划重点项目2012GA810001

在线出版日期：2016-09-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：1228-1236