猪精原干细胞体外分离培养及诱导分化的研究

摘要：

本研究旨在建立猪精原干细胞(Porcine spermatogonial stem cells,pSSCs)体外分离和诱导分化,并探索pSSCs定向分化及分化过程中关键基因的表达情况.采用差速贴壁法分离pSSCs和支持细胞(Sertoli),采用生化和免疫学方法鉴定其干细胞特性;传至3代后通过添加不同诱导剂,诱导SSCs向脂肪细胞、神经元样细胞和成骨细胞分化,并通过生化染色、qRT-PCR和免疫细胞化学检测诱导效果.结果表明:分离得到的pSSCs在饲养层上生长良好,碱性磷酸酶(AKP)及SOX2、integrinα6、SSEA1、Dazl抗体鉴定均呈阳性,表明SSCs处在未分化状态.诱导8d后,甲苯胺蓝染色及NSE抗体鉴定成阳性,成功诱导SSCs为神经元样细胞;诱导16d后,ALP、Von Kos-sa染色及Collagon l抗体鉴定均呈阳性,诱导SSCs为成骨细胞;诱导22 d后,油红O染色可见脂滴被染成红色,诱导SSCs成为脂肪细胞.在SSCs诱导过程中,qRT-PCR结果显示,Nestin和ptubulin在6d左右表达量最高,Cb凡1和Osterix在12 d左右表达量最高,PPARγ和C/EBPα在18 d左右表达量最高.本研究成功分离获得pSSCs,并且pSSCs可分别定向诱导分化为成骨细胞、神经元样细胞和脂肪细胞,表达细胞特有标记基因.

关键词：精原干细胞、体外培养、诱导分化、基因表达

所属期刊栏目：45

分类号：S828;S814(家畜)

资助基金：转基因生物新品种培育重大专项2011ZX08006-005

在线出版日期：2016-09-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：1104-1112