RNA干扰沉默PID1基因肉兔模型的构建

摘要：

为进一步研究PID1基因的功能,本试验在前期构建并筛选得到的高效PID1 RNA干扰表达载体pG-PU6/GFP/Neo-PID1-2的基础上,利用精子介导法制备RNA干扰PID1转基因肉兔模型.对繁殖的F1代肉兔个体进行活体荧光检测、PCR、RT-PCR和Western blot检测,并对不同组别(阳性组、阴性组和空白对照组)体重达3.0 kg左右的F1代肉兔抽样屠宰进行肌内脂肪的测定.研究结果表明:外源基因和绿色荧光蛋白基因(GFP)在转基因兔后代中可成功表达,试验组得到F1代个体106只,其中阳性兔7只,转基因阳性率为6.60％.PID1基因RNAi阳性兔与阴性兔、空白对照兔相比,RT-PCR检测PID1基因mRNA表达量显著降低(P＜0.05),Westernblot测得PID1蛋白表达水平呈下降趋势,肌内脂肪的含量显著降低(P＜0.05);综上表明,PID1基因与肌内脂肪沉积密切相关.本研究从RNAi肉兔模型构建的角度进一步验证了PID1基因对肌内脂肪沉积影响的功能,也为下一步研究制备高肌内脂肪优质PID1转基因猪奠定了基础.

关键词：新西兰肉兔、PID1基因、RNA干扰、肌内脂肪

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分类号：S829.1;S813.3(家畜)

资助基金：国家转基因重大专项2011ZX08006-002,2013ZX08006-002;国家高技术研究发展计划863计划重点项目2008AA101008;山东省现代农业生猪产业技术体系建设专项SDAIT-06-011-02;山东省农业良种工程重大项目2011LZ013-03

在线出版日期：2016-09-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：750-756