猪流行性腹泻病毒、猪肠道病毒9型及猪嵴病毒三重RT-PCR检测方法建立及初步应用

摘要：

旨在建立一种同时检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪肠道病毒9型(PEV-9)、猪嵴病毒(PKV)的三重RT-PCR法,并初步应用于临床样品检测.根据GenBank中PEDV和PKV基因序列保守区设计2对引物,参照文献合成1对PEV-9引物,在同一体系进行RT-PCR扩增,对引物浓度、退火温度、灵敏度、特异性等进行优化,应用该法对采自四川省6个猪场46份样品进行检测.结果表明引物量分别为PEDV 0.5 μL、PEV-9 0.25 μL、PKV0.25 μL,退火温度为55℃时扩增效果最理想;本方法最低检测量分别为PEDV 5.97 pg、PEV-9 0.11 pg、PKV0.74 pg;用该方法对猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒、猪萨佩罗病毒、猪博卡病毒、猪环曲病毒、猪源大肠杆菌、猪源沙门菌、副猪嗜血杆菌、猪链球菌和空肠弯曲杆菌等病原进行RT-PCR扩增时,均无非特异性扩增条带出现.对46份腹泻样品的检测结果显示,PEDV感染率为76.1％、PEV-9为73.9％、PKV为39.1％,3种病原在同一样本检出率达29.1％,表明存在混合感染或协同致病的可能;与单项RT-PCR法相比,阳性样本的检出符合率均在91％以上,表明该方法具较高可信度.建立的方法可快速、准确地检测3种猪腹泻病毒性病原,为病原学诊断和分子流行病学调查提供了有效技术支持.

关键词：多重RT-PCR、PEDV、PEV-9、PKV、检测

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分类号：S858.285.3;S852.659.6(动物医学（兽医学）)

资助基金：“十二五”国家高技术研究发展863计划项目2012AA101304;西南民族大学中央高校基本科研业务费专项资金项目2014NZYQN42;四川省教育厅创新团队项目13TD0057;西南民族大学研究生学位点建设项目2014XWD-S0906

在线出版日期：2016-09-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：603-608