徐淮山羊c-Myc基因启动子的克隆及其功能的初步分析

摘要：

本研究旨在确定徐淮山羊c-Myc基因启动子区域,找出该基因启动子的核心调控区,初步探讨c-Myc基因的表达调控机制.根据UCSC基因组数据库已公布的绵羊c-Myc基因的启动子序列,设计特异性PCR引物扩增c-Myc基因的一系列启动子缺失片段,定向克隆至pEGFP-N1和PGL3-c-Myc,分别转染gFF、COS7及P19细胞,并进行TSA和NFAT1诱导,同时对-402～-249 bp区域的转录因子SP1结合位点进行定点突变,最后进行双荧光报告基因活性检测.结果表明,徐淮山羊c-Myc基因5′侧翼区-1 334～+1 bp区域的启动子活性最强,-402～+1 bp区域为c-Myc基因启动子基本活性区域.进一步研究发现,-1 334～-971 bp、-587～-147 bp区域存在正调控元件,-1 976～-1 334 bp、-971～-587 bp区域存在负调控元件.TSA和NFAT1均能增强PMyc启动子的活性,SP1结合位点定点突变后,启动子活性降低.本试验通过构建包含c-Myc基因启动子不同片段的重组报告基因载体并比较其转录活性,确定了c-Myc基因启动子的核心区域,发现转录因子SP1是c-Myc基因启动子核心区域的调控元件,为进一步研究c-Myc基因的表达调控机制奠定了基础.

关键词：c-Myc基因、启动子、TSA、NFAT1、SP1、定点突变、活性分析

所属期刊栏目：45

分类号：S827;S813.3(家畜)

资助基金：国家转基因重大专项2013ZX08008-003

在线出版日期：2016-09-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：533-540