PiggyBac转座子介导的转FGF5s基因绒山羊胎儿成纤维细胞的制备

摘要：

本研究旨在建立可稳定表达FGF5s的绒山羊胎儿成纤维细胞系.采用RT-PCR方法,从陕北白绒山羊皮肤组织cDNA中克隆FGF5s基因,构建PB转座子介导的真核表达载体PB-EGFP-FGF5s;在脂质体的介导下,将PB-EGFP-FGF5s载体和转座酶载体共转染绒山羊胎儿成纤维细胞,通过嘌呤霉素进行稳定筛选.并利用PCR和RT-PCR鉴定FGF5s基因在细胞基因组中的整合及表达情况.结果表明,成功克隆了陕北白绒山羊FGF5s基因并构建了PB-EGFP-FGF5s真核表达载体;PCR结果显示,FGF5s已整合到细胞基因组中;RT PCR结果表明,该基因在转录水平上表达.另外,转染试验表明PB转座子可在绒山羊胎儿成纤维细胞中发生高效转座.本研究为制备绒山羊转基因细胞系提供了一种高效的方法,并为下一步通过核移植方法获得转基因绒山羊奠定了基础.

关键词：陕北白绒山羊、FGF5s、PiggyBac转座子、稳定转染

所属期刊栏目：44

分类号：S827;S814.8(家畜)

资助基金：国家重大转基因专项2011ZX08008-002;国家自然科学基金31101684;西北农林科技大学拔尖人才支持计划

在线出版日期：2014-03-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1926-1931