慢病毒载体介导稳定表达CD163的PAM细胞系的建立及对PRRSV感染的研究

摘要：

本研究旨在通过慢病毒载体系统将猪源CD163转染入永生化的猪肺泡巨噬细胞(PAM)系(CRL-2843),建立稳定表达CD163的PAM细胞系(PAM-CD163)及验证该细胞系对PRRSV的易感性.用PCR方法从p JET1.2-CD163载体上扩增CD163基因编码区,通过酶切连接构建慢病毒表达载体pTrip-CMV-CD163-IRES-pur.将该质粒与慢病毒包装质粒psPAX2和pMD2.G共转染293-T细胞,包装表达CD163的慢病毒.将收获的慢病毒在Polybrene的介导下转导至永生化PAM细胞,采用嘌呤霉素筛选和细胞有限稀释法筛选出稳定表达CD163的PAM细胞系.应用得到的细胞系进行PRRSV感染试验.经过RT-PCR、间接免疫荧光试验、Westernblot和流式细胞术试验证实,筛选出1株能稳定表达CD163的PAM细胞系,命名为PAM-CD163.该株细胞对PRRSV高度易感,PRRSV在PAM-CD163细胞上的毒价可以达到105.0 TCID50·mL-1以上.建立了稳定表达CD163的PAM细胞系,可以用于PRRSV的分离培养和细胞受体的研究.

关键词：CD163、慢病毒载体、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪肺泡巨噬细胞

所属期刊栏目：44

分类号：S858.285.3;Q789(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金U0931003/L01、31101690;国家高技术研究发展计划863计划2011AA10A208-4

在线出版日期：2014-03-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：1797-1804