超低温冷冻过程引起猪精子产生“似凋亡”变化

摘要：

测定超低温冷冻保存过程能否诱导猪冻融精子产生“似凋亡”变化,探讨猪冻融精子活力降低的分子机理.利用Annexin-V/PI及JC-1荧光抗体试剂盒与流式细胞术相结合的方法,检测猪精子冷冻前后及不同培养时间冻融精子质膜中磷脂酰丝氨酸(PS)位置及线粒体膜电位(△ψm)变化;蛋白免疫印迹分析方法测定猪精子Bcl-2、Caspase-9及Caspase-3等“凋亡”因子含量变化.猪精子超低温冷冻保存后活性精子的比例(54.4％)显著低于鲜精组(87.9％)(P＜0.05),其中PS移位的精子“似凋亡”比例约为26.8％,同鲜精组(5.6％)相比增加21.2个百分点(P＜0.05);降温平衡及冷冻复苏后猪精子线粒体膜电位变化显著,其中低△ψm精子比例显著增加(P＜0.05);同新鲜精子(19.6％)相比,冷冻复苏后(79.4％)低△ψm精子比例提高59.8个百分点(P＜0.05);冻融精子中Bcl 2、Caspase-9及Caspase-3等凋亡因子活性显著高于鲜精子及降温平衡后的精子(P＜0.05),由此证明冻融过程能诱导猪精子进入凋亡状态.超低温冷冻保存能导致猪冻融精子质膜磷脂酰丝氨酸(PS)移位及线粒体膜电位降低,同时激发精子Bcl-2、Caspase-9及Caspase-3等凋亡因子活性,诱导成活冻融精子提前进入“似凋亡”状态,明显缩短冻融精子存活时间,这可能是猪冻精繁殖力降低的又一诱因.

关键词：低温保存、似凋亡、线粒体膜电位、精子、猪

所属期刊栏目：44

分类号：S828;S814.8(家畜)

资助基金：上海市科技兴农攻关项目沪农科攻字2009第5-1号;上海市自然基金项目ZR07150046

在线出版日期：2014-03-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：1766-1774