林麝IL-1β基因的克隆、表达及生物学活性检测

摘要：

旨在克隆和表达林麝IL-1β,为其用于林麝疾病的防治奠定基础.从林麝外周血单核细胞中提取总RNA,RT-PCR扩增IL-1β(Interleukin-1β)基因.将IL-1β成熟肽编码序列连接到pET32a(+)原核表达载体进行表达,纯化目的蛋白并检测其生物学活性.序列分析表明,林麝IL-1β开放阅读框(ORF)长801 bp,编码266个氨基酸,且在反刍动物中高度保守.IPTG诱导林麝IL-1β融合蛋白(MB-rIL-1β)表达,得到约35 ku的目标带,且大部分以可溶形式存在.对上清蛋白分离纯化得到约35 ku的单一条带.细胞增殖试验结果显示,林麝IL-1β融合蛋白能明显促进小鼠成纤维细胞(L929)增殖,表明其具有生物学活性.运用大肠杆菌表达系统可高效可溶性表达具有生物学活性的MB-rIL-1β融合蛋白.

关键词：林麝、IL-1β、原核表达、蛋白纯化、活性检测

所属期刊栏目：44

分类号：S829.9;S813.1(家畜)

在线出版日期：2014-03-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1734-1738