施马伦贝格病毒核衣壳蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备

摘要：

本研究旨在表达施马伦贝格病毒(Schmallenberg virus,SBV)的核衣壳蛋白(N),进而制备其多克隆抗体.以SBV(BH80株)的RNA为模板,RT-PCR扩增N基因序列,并将其克隆至原核表达载体pET-28a-c(+)中,获得pET-28a-SBV-N重组质粒.经酶切和测序鉴定后,将重组质粒转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达His-SBV-N融合蛋白.在非变性条件下用Ni NTA柱纯化His-SBV-N,并以此为抗原免疫新西兰大白兔制备多抗.经免疫亲和层析纯化后,利用Western blot和间接免疫荧光对多抗进行鉴定.结果表明:(1)His-SBV-N融合蛋白在E.coli BL21(DE3)中同时以可溶性和包涵体2种形式表达,相对分子质量约为30 ku; (2)制备的多抗效价高达1:64 000.该多抗不仅能与His-SBV-N融合蛋白发生特异性反应,而且还能识别SBV的不同毒株,但与布尼亚病毒科内亲缘关系最近的沙门达病毒(Shamonda virus)、道格拉斯病毒(Douglas virus)和赤羽病病毒(Akabane virus)的核衣壳蛋白存在交叉反应.His-SBV-N融合蛋白及其多抗的成功制备,为施马伦贝格病血清学检测方法的建立奠定了物质基础.

关键词：施马伦贝格病毒、核衣壳蛋白、原核表达、多克隆抗体、免疫亲和层析

所属期刊栏目：44

分类号：S852.659.5(动物医学（兽医学）)

资助基金：“十二五”国家科技支撑计划课题2013BAD12B01;国家质检总局科技计划项目2013IK054;中国检验检疫科学研究院基本科研业务费专项资金2012JK011

在线出版日期：2014-02-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：1629-1636