汉赛巴尔通体17-kDa蛋白的表达及间接ELISA方法的建立

摘要：

为探讨中国猪群中是否存在巴尔通体感染情况,作者将汉赛巴尔通体17-kDa蛋白基因按大肠杆菌密码子偏嗜性改造后进行全基因人工合成,然后将目的基因克隆到原核表达载体pET-28a中,构建重组质粒pET-28a-17kDa,导入大肠杆菌BL21感受态细胞中,进行诱导表达,并用Ni-NTA纯化试剂进行纯化;纯化后的蛋白应用His单抗进行鉴定.以17-kDa蛋白作为包被抗原,优化ELISA反应条件,建立检测抗汉赛巴尔通体17-kDa蛋白抗体的间接ELISA方法.结果如下:抗原包被量0.4 μg·mL1,37℃包被2h后4℃过夜,1％BSA 37℃封闭3h,待检血清1∶100稀释后,37℃孵育1h,二抗1∶15 000稀释,37℃作用30 min,抗体临界值OD450nm≥0.392判为阳性,OD400nm≤0.332 6判为阴性,介于二者之间为可疑.建立的ELISA与猪嗜血支原体、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪口蹄疫病毒等感染血清无交叉反应,批间和批内重复性较好,对379份血清样品进行检测,抗体阳性检出率达51.72％.该方法可用于汉赛巴尔通体抗体检测和流行病学调查.

关键词：巴尔通体、17-kDa蛋白、间接ELISA

所属期刊栏目：44

分类号：S852.64(动物医学（兽医学）)

资助基金：公益性行业农业科研专项200903036-10

在线出版日期：2014-02-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1616-1621