新生仔猪口腔黏膜上皮细胞的体外培养方法

摘要：

为了建立仔猪口腔黏膜上皮细胞(oral mucosal epithelial cells,OMEC)的体外培养方法,取新生仔猪的口腔颊膜组织,分别采用组织块培养法、胰蛋白酶消化法、DispaseⅡ和胰蛋白酶联合消化培养法、DispaseⅡ处理联合组织块培养法,对口腔黏膜上皮细胞进行原代和传代培养,用倒置显微镜观察培养细胞形态学特征及生长情况,对传代培养的OMEC,采用间接免疫荧光法检测广谱细胞角蛋白的表达情况,并进行透射电镜观察,用MTT法测定细胞的生长曲线,流式细胞仪检测其细胞周期.结果表明,在采用相同培养基条件下,采用组织块培养法、胰蛋白酶消化法不能成功培养仔猪OMEC,用DispaseⅡ和胰蛋白酶联合消化法培养的细胞不易贴壁,培养困难,采用DispaseⅡ处理联合组织块培养法培养的细胞增殖能力强,细胞纯度高,可连续传到10～11代,经鉴定具有OMEC特征.本试验成功建立了仔猪口腔黏膜上皮细胞的原代及传代培养方法,为进一步研究OMEC的永生化及猪口蹄疫致病机理和疫苗提供理想实验材料.

关键词：口腔黏膜上皮细胞、体外培养、DispaseⅡ联合组织块培养法、新生仔猪

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分类号：Q813.1(生物工程学(生物技术))

资助基金：陕西省13115科技创新工程重大科技专项2010ZDKG-71

在线出版日期：2014-01-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：1445-1453