猪传染性胃肠炎病毒M、sM基因重组杆状病毒的构建及病毒样颗粒的组装

摘要：

利用RT-PCR方法扩增猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)M和sM结构蛋白基因,将其分别克隆入载体pFastBacTM Dual,获得转移质粒pFastBacTM Dual-M和pFastBacTMDual-M-sM,将重组质粒转化至DH10Bac感受态细胞,经抗性与蓝白斑筛选,获得杆状病毒重组质粒Bacmid-M和Bacmid-M-sM,在Cellfection作用下,将杆状病毒重组质粒转染昆虫细胞sf9,获得重组杆状病毒rBac-M和rBac-M-sM.通过Western Blot、间接免疫荧光试验(IFA)进行检测,结果显示:重组蛋白在杆状病毒感染的sf9昆虫细胞中获得正确表达.将重组杆状病毒rBac-M和rBac-M-sM分别感染sf9昆虫细胞,进行TGEV病毒样颗粒(VLPs)的体外组装试验.结果表明,M蛋白在sf9细胞内单独表达,M蛋白和sM在sf9细胞内共同表达,都可形成TGEV病毒样颗粒,而且病毒粒子大小不等,直径在61～101 nm.试验结果为进一步研究TGEV结构蛋白在病毒装配过程中的作用提供了理论依据.

关键词：猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、M基因、sM基因、sf9细胞、病毒样颗粒

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分类号：S852.659.6(动物医学（兽医学）)

资助基金：中央高校基本科研业务基金XDJK2010C094;重庆自然科学基金2008BB5243;乌鲁木齐市科技计划项目Y121210005

在线出版日期：2014-01-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1432-1437