鸡斑联蛋白基因的慢病毒干扰载体的构建及筛选

摘要：

本试验旨在构建4条鸡斑联蛋白(zyxin)基因的RNAi慢病毒载体,对其进行滴度测定,并进行有效干扰靶点的筛选,为以后开展鸡zyxin基因抗球虫机理的研究奠定基础.提取鸡胸腺组织的RNA,反转录,扩增zyxin基因的编码区,并将其克隆到真核表达载体Pex-6上.设计针对zyxin的shRNA序列,应用基因重组技术插入到Lv3慢病毒表达载体中,将lv3-shRNA载体与包装质粒pGag/Pol、pRev、Pvsv-G共转染293T细胞,进行病毒包装.将得到的病毒原液10倍稀释6个梯度,分别转染293T细胞,进行滴度的测定.将构建好的4条慢病毒载体与Pex-6-zyxin真核表达载体共转染293T细胞,运用RT-PCR和Western-blot方法进行有效干扰靶点的筛选.构建4条针对目的基因zyxin的RNAi慢病毒穿梭质粒表达载体CO1、CO2、CO3、CO4和1个阴性对照质粒,经测序鉴定正确;共转染293T细胞包装病毒并浓缩后滴度达1 × 108 TU·mL-1,适合感染目的细胞,经过筛选,CO3对zyxin在293T细胞中的表达干扰效果最佳.成功构建了zyxin基因RNA干扰慢病毒表达载体,并进行了有效干扰靶点的筛选,为进一步研究zyxin基因的功能奠定了基础.

关键词：zyxin基因、RNAi、慢病毒干扰载体、真核表达载体、鸡

所属期刊栏目：44

分类号：S813.3(普通畜牧学)

资助基金：国家肉鸡产业技术体系nyctx-42-G1-05;江苏省高校自然科学研究重大项目11KJA230001;江苏高校优势学科建设工程资助项目

在线出版日期：2013-12-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1330-1336