猪NF-kappaB p65/p50基因克隆、序列鉴定及实时荧光定量PCR检测方法的建立

摘要：

NF-κB信号通路在病毒感染、免疫损伤性疾病、肿瘤疾病中发挥重要作用,其活化水平常作为机体免疫应答水平、疾病发展进程的检测指标.为获得猪NF-κB p65/p50基因序列特征并建立体外定量检测其表达水平的实时荧光定量PCR方法,作者对猪NF-κB p65 ORF和成熟p50编码区进行RT-PCR扩增、克隆、测序及生物信息学分析;设计特异性荧光定量引物,建立检测p65、p50实时荧光定量PCR方法.结果显示:所扩增的猪NF-κB p65ORF长1662 bp,编码553 aa,成熟p50编码区长1653 bp,编码551 aa;与不同动物的p65、p50序列相似性均较高;56.5％ p65位于细胞核内,78.3％p50存在于细胞质中,p65、p50均无信号肽及跨膜区.荧光定量结果表明:起始模板与Ct值之间线性关系好,相关系数达到0.999,扩增效率均在95％左右;敏感性高,初始模板的检出下限达到101 copies·μL-1;特异性强,扩增产物形成单一的特异性熔解峰;重复性好,组内变异系数均小于5‰.本试验为进一步研究猪NF-κB p65/p50生物学功能及其在猪相关疾病发生发展中表达量变化奠定了基础.

关键词：猪、核转录因子-kappaB、序列分析、实时荧光定量RT-PCR

所属期刊栏目：44

分类号：S828;Q781(家畜)

资助基金：四川省科技支撑计划项目资助2011FZ0065;"四川省科技支撑计划项目-生猪现代产业链关键技术研究集成与产业化示范"资助

在线出版日期：2013-12-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：1288-1296