新疆野生盘羊ISG15基因的克隆表达

摘要：

本研究旨在克隆表达新疆野生盘羊ISG15基因,并对其表达产物的活性进行检测.首先,利用RT-PCR和RACE技术克隆盘羊ISG15基因的cDNA全长序列,再将ISG15基因克隆至真核表达载体pPIC9K,经电击转化至GS115中并用甲醇进行诱导表达,用Ni2+螯合亲和层析法对表达的蛋白进行纯化,最后通过淋巴细胞转化试验来检测表达蛋白的活性.结果表明:克隆得到的新疆野生盘羊ISG15基因cDNA全长为642 bp,开放阅读框为474 bp,编码157个氨基酸.经酵母重组菌株GS115/pPIC9 K-ISG15表达,SDS-PAGE结果显示表达的蛋白约为33 ku,表达的蛋白可用Ni2+螯合亲和层析方法纯化,淋巴细胞增殖试验结果显示,表达的ISG15蛋白能够显著地刺激淋巴细胞增殖(P＜0.05),表明表达的蛋白具有生物学活性.

关键词：野生盘羊、ISG15、克隆表达、活性检测

所属期刊栏目：44

分类号：S826;S813.3(家畜)

资助基金：国家自然科学基金31060351

在线出版日期：2013-09-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1023-1029