整合型诱导表达猪生长激素(pGH)载体的构建及表达研究

摘要：

旨在构建整合型诱导表达猪生长激素(Porcine growth hormone,pGH)载体,在细胞水平验证其诱导效率及表达效率.从pTRE-GH12载体上扩增TRE-GH片段,通过SalⅠ酶切位点连接到pCAGGS-rtTA载体中,构建重组载体pCAGGS-rtTA-TRE-GH 12(下称pTTGH),将pTTGH质粒转染猪PK15细胞,经G418筛选后,在培养液中添加诱导底物强力霉素(Doxycycline,DOX)后不同时间段通过实时荧光定量PCR (QRT-PCR)测定细胞内pGH mRNA的表达；在培养液中添加不同浓度的的DOX,通过QRT-PCR及Western blot测定细胞内pGH的表达变化.酶切及测序结果表明成功构建了pTTGH载体；QRT-PCR结果表明,和对照组相比,试验组细胞培养液中添加诱导底物后外源GH基因表达在36 h时最高；在一定浓度范围内,外源GH表达水平和添加DOX的浓度呈现出正相关性,而正常细胞组中GH的表达水平不受DOX添加与否及量的影响.通过条带灰度分析Western杂交结果验证了培养基中一定范围内DOX浓度和pGH表达量呈现出正相关.试验结果表明,本研究成功构建了整合型诱导表达GH载体并能实现GH的可控表达,本研究为以后制备可控表达GH转基因动物、进一步研究GH对机体影响奠定基础.

关键词：诱导表达、猪生长激素、整合型、真核表达载体

所属期刊栏目：44

分类号：S828;S813.3(家畜)

资助基金：国家转基因新品种培育重大专项2011ZX08006-003;国家自然科学基金资助项目31272405,31000993;江苏高校优势学科建设工程资助项目

在线出版日期：2013-09-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1008-1013