兔白细胞介素-10基因的克隆、原核表达及其多克隆抗体的制备

摘要：

白细胞介素-10(IL-10)是一种多功能的细胞因子,参与免疫调节和抗炎反应.本研究旨在克隆并表达IL-10基因,以制备兔IL-10多克隆抗体.运用RT-PCR技术从新西兰白兔脾脏总RNA中扩增IL-10基因,将该基因亚克隆入原核表达载体pET-32a并转入大肠杆菌BL21 (DE3)中诱导表达获得融合蛋白,融合蛋白经纯化后免疫豚鼠制备多克隆抗体,最后分别用间接ELISA和Western blot检测抗体的效价和特异性.结果表明:克隆得到了兔IL-10基因,大小为537 bp,经核苷酸测序与GenBank已登录的基因序列(NM_001082045)相似性为99％;重组载体pET-IL-10构建成功;SDS-PAGE电泳结果显示融合蛋白成功表达;制备的多克隆抗体效价高达1∶56 000,且具有很高的特异性.成功实现了兔IL-10基因的原核表达,并制备了豚鼠抗兔IL-10多克隆抗体,为深入研究兔IL-10基因的功能奠定了基础.

关键词：白细胞介素-10基因、克隆、表达、抗体制备

所属期刊栏目：44

分类号：Q78;S829.1(基因工程（遗传工程）)

资助基金：现代农业产业技术体系建设专项资金资助CARS-44-1;江苏高校优势学科建设工程资助项目苏政办发[2011]137号;江苏省研究生科研创新计划CXLX11_1027

在线出版日期：2013-08-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：788-795