鹅胆固醇7α-羟化酶基因克隆及原核表达

摘要：

为进一步研究胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1)在胆汁酸合成和胆固醇代谢过程中的调节机制,采用RT-PCR和RACE方法从鹅(Anser anser)肝组织克隆CYP7A1基因全长cDNA序列,亚克隆其CDS区并构建原核表达载体pET-28a-cyp7α1.重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中经IPTG诱导表达.经His-Bind纯化试剂盒纯化的His-CYP7A1免疫Bal b/c小鼠,制备小鼠抗鹅CYP7A1多克隆抗体,Western blotting验证His-CYP7A1免疫原性和抗体的特异性.序列分析结果表明,该蛋白与鸡、大鼠、人、短尾猊、小鼠的CYP7A1蛋白氨基酸序列同源性分别为93 ％、66％、67％、68％、66％.SDS-PAGE分析结果表明,重组蛋白His-CYP7A1得到正确高效表达,该His0CYP7A1分子质量约为59 ku,经纯化获得高纯度重组His-CYP7A1蛋白.制备了小鼠抗鹅CYP7A1多克隆抗体,效价达1∶104.Western blotting检测表明,该蛋白能够被小鼠抗His抗体和小鼠抗CYP7A1抗体所识别,小鼠抗CYP7A1多克隆抗体具有较好的特异性.试验结果为进一步研究CYP7A1基因结构和CYP7A1在鹅肝脏脂类代谢中的作用提供了基础和技术手段.

关键词：鹅、CYP7A1基因、分子克隆、原核表达、多克隆抗体

所属期刊栏目：43

分类号：S835;S813.1(家禽)

资助基金：浙江省自然科学基金Y3110268

在线出版日期：2013-01-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1559-1565