绵羊Gfrα1基因的部分cDNA克隆与抗原表位多肽的原核表达

摘要：

旨在克隆绵羊Gfrα1基因序列,深入研究绵羊精原干细胞(SSCs).本研究通过RT-PCR扩增和分子克隆的方法克隆到了绵羊Gfrα1基因的编码区大部分片段.结果,克隆得到的绵羊Gfrα1基因的大部分cDNA序列长1 312 bp,包括1 311 bp的开放阅读框(ORF),编码437个氨基酸,与牛、人、黑猩猩、大鼠和小鼠相应核苷酸序列的同源性分别为98.5％、91.3％、91.0％、88.9％和88.0％.根据获得的cDNA序列,预测已知片段的抗原表位区,并将抗原表位区序列插入pET-44a(+)载体,经转化得到重组菌,经IPTG诱导表达,并通过亲和柱层析,纯化制备GFRα1抗原表位多肽.Western blot检测发现,经诱导表达的GFRα1抗原表位多肽约为18.2 ku,与预测的大小一致.绵羊Gfrα1基因的克隆和表达研究,为进一步制作该基因的多克隆抗体奠定基础,为绵羊SSCs的分子水平鉴定及功能分析提供了研究条件.

关键词：绵羊、Gfrα1基因、克隆、序列分析、原核表达

所属期刊栏目：43

分类号：S826;Q785(家畜)

资助基金：教育部创新团队计划子课题IRT0833;高等学校博士学科点博导类基金项目20101501110001

在线出版日期：2013-01-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：1377-1384