猪繁殖与呼吸综合征病毒GP3/GP5/M真核表达载体的构建及其体液免疫应答

摘要：

本试验旨在构建表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) GP3、GP5和M蛋白的真核重组质粒.以PRRSV LN株为模板,采用PCR方法扩增出GP3、GP5、M基因片段,将扩增的GP5、M通过Linker序列串联成GP5-M,然后将GP3与GP5-M双酶切后插入peDNA3.1(+)构建重组质粒pcDNA3.1-GP3-GP5-M,将其转染COS7细胞.PCR鉴定表明重组质粒pcDNA3.1-GP3-GP5-M含有PRRSV GP3、GP5-M基因,间接免疫荧光检测表明GP3、GP5-M蛋白在COS7细胞内获得表达.Western blotting检测证实GP3、GP5、M蛋白获得正确表达,并且所表达的GP3、GP5、M蛋白是融合蛋白.将pcDNA3.1-GP3-GP5-M免疫BALB/c小鼠,首免后2周可检测到特异性PRRSV中和抗体,首免后8周中和抗体效价最高可达1∶32.进一步将pcDNA3.1-GP3-GP5-M免疫断奶仔猪,首免后4周即可产生1∶4～1∶8的中和抗体.本试验成功构建了表达PRRSV GP3、GP5和M融合蛋白的真核重组质粒pcDNA3.1-GP3-GP5-M,中和抗体检测表明pcDNA3.1-GP3-GP5 M具有良好的免疫原性,从而为PRRSV基因工程疫苗的研制奠定基础.

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、GP3蛋白、GP5蛋白、M蛋白

所属期刊栏目：43

分类号：S852.659.6(动物医学（兽医学）)

在线出版日期：2012-11-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1266-1272