miR-200a对奶山羊乳腺上皮细胞乳脂合成相关基因mRNA表达的影响

摘要：

旨在构建pAd-pri-miR-200a重组腺病毒,使其在奶山羊乳腺上皮细胞中稳定表达miR-200a,研究miR-200a对乳脂合成相关基因mRNA表达的影响.以西农萨能羊DNA为模板扩增pri-miR-200a.采用Ad-Easy系统构建重组腺病毒载体pAd-pri-miR-200a,并于HEK 293细胞株中进行病毒的包装、扩繁.TCI50法测定病毒滴度.qRT-PCR检测miR-200a及16个乳脂合成相关基因mRNA表达水平.序列分析结果显示,pri-miR-200a包括pre-miR-200a 86 bp和侧翼序列共297 bp.酶切结果证实pAd-pri-miR-200a构建成功.Ad-pri-miR-200a滴度达8×109 PFU· mL-1.实时定量结果表明,Ad-pri-miR-200a(MOI为200)感染奶山羊乳腺上皮细胞72 h,miR-200a的表达量较对照高出2.4倍.同时miR-200a的过表达引起10个基因mRNA表达量下调,6个基因mRNA表达量上调.其中脂肪酸从头合成相关基因FASN、脂滴生成相关基因TIP47及脂肪酸运输相关基因FABP4降幅较大,分别下降了0.47、0.89及0.65倍.而TAG生成相关基因DGAT1和脂解相关基因HSL较对照分别增加了0.52和1.49倍.本研究获得的重组腺病毒Ad-pri-miR-200a能在山羊乳腺上皮细胞中稳定表达miR-200a,同时miR-200a过表达影响乳脂合成相关基因mRNA表达水平.

关键词：pri-miR-200a、重组腺病毒、乳腺上皮细胞、西农萨能羊

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分类号：S827;S813.3(家畜)

资助基金：转基因生物新品种培育重大专项2009ZX08009-162B;陕西省科技创新工程重大科技专项2009ZKC0701;公益性行业农业科研专项201103038

在线出版日期：2012-11-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：1028-1036