山羊c-Myc原癌基因原核表达和多克隆抗体的制备

摘要：

c-Myc原癌基因与胚胎干细胞(ES细胞)和诱导的多能性干细胞(iPS细胞)生物学特性密切相关,因此制备其相应的多克隆抗体尤为必要.本研究以pMD18T-Myc质粒为模版,PCR扩增c-Myc片段,然后将其亚克隆到pSE380表达载体上,获得pSE380-Myc重组质粒.该质粒转化工程菌BL21(DE3),IPTG诱导表达His-Myc融合蛋白,随后用SDS-PAGE电泳及Western blot加以验证.在变性条件下用Ni-NTA argrose介质分离纯化His-Myc融合蛋白,并以此为抗原免疫新西兰大白兔.经过4次免疫,采集血液、分离血清,用Western blot检测抗体特异性.结果表明:(1)pSE380-Myc重组质粒在工程菌BL21( DE3)得到了高效表达；(2)得到了高纯度高含量的His-Myc融合蛋白；(3)经Wstern blot检测发现,c-Myc多克隆抗体与His-Myc融合蛋白能够特异性结合.本研究获得的特异性山羊c-Myc多克隆抗体,为进一步研究山羊ES细胞和iPS细胞的自我更新机制奠定了基础.

关键词：山羊、c-Myc基因、蛋白纯化、多克隆抗体

所属期刊栏目：43

分类号：S827;Q786(家畜)

资助基金：广西自然科学基金项目桂科自0991043;广西亚热带生物资源保护与利用重点实验室开放课题SB09;广西大学基金项目X081102

在线出版日期：2012-08-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：867-871