山羊类ES细胞的分离与培养

摘要：

旨在优化并建立有利于山羊类ES细胞生长的饲养层细胞、培养基、细胞因子和传代方法.本研究选择武汉市本地白山羊配种6～7 d后的胚胎,通过全胚培养法、酶消化与机械分离结合法分离山羊类ES细胞,并在不同的细胞饲养层中饲养、在培养基中添加不同的生长因子、采用不同的传代方法,比较不同培养条件对山羊类ES细胞生长和增殖的影响.通过碱性磷酸酶染色和免疫组化染色法鉴定ES细胞特异生物标记AKT、SSEA-1和Oct-4的表达,并将得到的山羊类ES细胞进行体外分化.结果表明,与小鼠胎儿成纤维细胞(Mouse embryonic fibroblast,MEF)和山羊胎儿成纤维细胞(Goat embryonic fibroblast,GEF)相比,C2C12更有利于细胞的贴壁,但差异不显著(P＞0.05)；细胞传代时,在高浓度细胞因子LIF(Leukemia inhibitory factor)和SCF(Stem cell factor)中处理ICM(Inner cell mass),更有利于细胞传代(传至第8代)；培养基中添加LIF和SCF的同时,添加肝素和胰岛素,更有利于细胞的传代(传至第9代)；山羊类ES细胞中SSEA-1(Stage-specific embryonic antigens-1)和Oct-4免疫组化染色呈阳性,在体外培养时可以分化为上皮样细胞、空泡样细胞和跳动的类心肌细胞.成功分离得到能自然分化成不同类型细胞的山羊类ES细胞.

关键词：胚胎干细胞、内细胞团、山羊

所属期刊栏目：42

分类号：S85;S81

资助基金：国家“863”计划2007AA100505

在线出版日期：2012-01-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1187-1192