口蹄疫病毒VP2基因重组表达载体的构建及其稳定表达细胞系的建立
本试验旨在构建Asia 1型口蹄疫病毒(FMDV)的VP2基因重组表达载体,并建立稳定表达VP2基因的BHK-21细胞系.利用RT-PCR方法扩增Asia 1型FMDV的cDNA,获得VP2基因完整的编码区,构建可表达VP2的带有绿色荧光蛋白标记基因的pIRES2-EGFP-VP2重组表达载体.经鉴定正确后,利用LipofeetamineTM 2000将重组质粒转染293T细胞,通过Western Blot技术检测VP2蛋白的瞬时表达;然后再转染BHK-21细胞,通过G418筛选,形成单克隆细胞系,经荧光筛选到表达EGFP的抗性单克隆细胞,扩繁培养克隆细胞.再通过Western Blot技术检测其VP2的表达,最终筛选到稳定表达FMDV VP2基因的BHK-21细胞系.结果表明,VP2基因重组表达载体pIRES2-EGFP-VP2构建正确,能够在293T细胞内瞬时表达;转染BHK-21细胞,经G418筛选到表达VP2基因的BHK-21细胞克隆,经长达60 d的传代,获得了稳定表达VP2基因和EGFP的BHK-21细胞系.上述结果表明,我们建立了稳定表达VP2基因的BHK-21细胞系,为进一步探讨VP2基因在FMDV诱导细胞凋亡中的作用奠定基础.
口蹄疫病毒、VP2、转染、稳定细胞系
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S852.659.6(动物医学（兽医学）)
国家转基因重大专项2009ZX08007-006B;山东省农业重大应用技术创新;山东省科技攻关项目2009GG20002032;兽医生物技术国家重点开放实验室开放基金SKLVBF200806;济南市高校院所自主创新计划201004027;泰山学者海外特聘专家;国家现代农业奶牛产业技术体系岗位科学家;国家自然科学基金31072160;山东省自然基金ZR2010CQ029
2011-07-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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