狮头鹅PRL基因的克隆及原核表达
为了进一步研究PRL对狮头鹅繁殖性能的生理调节机制,采用RT-PCR方法从狮头鹅脑垂体组织扩增获得PRL基因的cDNA序列,克隆至pMD18-T载体获得重组质粒pMD18-PRI,并进行序列测定和分析.将测序正确的cDNA序列定向克隆到pET32a(+),构建表达载体pET32a-PRI,并转化至BL21(DE3)大肠杆菌表达目的蛋白,经IPTG诱导后进行SDS-PAGE检测和Western Blot分析.狮头鹅PRL基因编码区含有600个核苷酸,编码199个氨基酸(GenBank No.GQ856665),与其它禽类PRL具有高度保守性;狮头鹅PRL蛋白二级结构由多个α螺旋和β转角及无规卷曲构成,推测N端70～76、95～102、150～155和207～213区段为其抗原表位的优势区.SDS-PAGE检测表明狮头鹅PRL基因在大肠杆菌中获得了高效表达,可溶性表达产物约占全菌总蛋白的53.6%,融合蛋白分子量约41 ku,并用镍柱亲和层析法分离纯化融合蛋白.Western Blot分析证实了所获的融合蛋白具有较强抗原性.式验结果为进一步研究PRL基因的生物功能及其对狮头鹅就巢、产蛋等生产性状的影响奠定了基础.
狮头鹅、催乳素、克隆、基因表达PRL蛋白
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S835;Q785(家禽)
湛江市科技招标项目0609135;广东海洋大学基金项目C04095;校企合作项目0810314
2011-07-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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