小反刍兽疫病毒N基因重组杆状病毒的构建及间接ELISA抗体检测方法的建立

摘要：

本研究旨在建立基于真核表达的小反刍兽疫病毒(PPRV)N蛋白的诊断小反刍兽疫的间接ELISA方法.利用Bac-to-Bac杆状病毒-昆虫表达系统,构建含有PPRV N基因的重组供体质粒pFastBacHTA-N,转化E.coli DH10Bac感受态细胞,得到重组穿梭质粒pBacmid-PPRV-V,转染昆虫细胞Sf21,获得含有PPRV N基因的重组杆状病毒.用重组病毒感染昆虫细胞后,SDS-PAGE鉴定出60 ku左右的表达蛋白,Western blot检测该蛋白具有很好的反应原性.以重组Bacmid-PPRV-N蛋白作为包被抗原,建立间接ELISA检测方法.临床检测来自西藏疫区的37份山羊血清和来自青海省非疫区的92份山羊血清,与法国蒙彼利埃农学发展研究国际合作中心(CIRAD-EMVT)提供的竞争ELISA试剂盒相比较,特异性为96.2%,敏感性为100%,二者的符合率达到96.9%.结果表明本研究建立的间接ELISA方法可以很好地用于小反刍兽疫的临床诊断.

关键词：小反刍兽疫病毒、杆状病毒、昆虫细胞、间接ELISA

所属期刊栏目：41

分类号：S852.659.5(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2008AA10Z411;"十一五"国家科技支持撑计划2006BAD06A13-4;"948"项目2007-G57-C;FAO/IAEA项目14515-0,R1

在线出版日期：2010-11-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1147-1153