猪星状病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用

摘要：

本研究旨在建立一种能够快速、简便、灵敏地检测猪星状病毒的基于SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法.根据已报道的猪星状病毒ORF2基因序列,设计并合成1对引物,通过PCR扩增ORF2基因片段,将测序正确的ORF2基因片段克隆入pMD18-T载体,转化大肠杆菌DH5α,经测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为标准品模板建立SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR标准曲线和熔解曲线,并对其灵敏性、特异性和重复性进行验证.结果表明,猪星状病毒荧光定量PCR的标准曲线Ct值与模板浓度呈良好的线性关系,熔解曲线特异,灵敏度可达1×101拷贝,是普通PCR检测方法的100倍,特异性和重复性较好.本次建立的猪星状病毒荧光定量PCR检测方法具有快速、简便、敏感等优点,有重要的实用价值.

关键词：SYBR Green Ⅰ、猪星状病毒、检测

所属期刊栏目：41

分类号：S852.659.6(动物医学（兽医学）)

在线出版日期：2010-09-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1049-1053