布氏杆菌和结核杆菌二重实时荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用

摘要：

本试验旨在利用二重实时荧光定量PCR技术建立鉴别诊断布氏杆菌和结核杆菌的方法.通过筛选布氏杆菌omp10、omp19、omp17、omp25、omp31和结核杆菌cfp10基因的最佳引物组合,建立二重实时定量PCR鉴别诊断方法,对该方法进行稳定性、特异性和敏感性试验,并对临床样品及模拟样品进行检测.经筛选布氏杆菌的omp25基因与结核杆菌cfp10基因引物组合最佳,该二重实时荧光定量PCR方法中布氏杆菌Tm值为88～89℃,结核杆菌Tm值为90～91℃,对其他供试的菌株则为阴性;该方法对布氏杆菌的DNA最低检出量为20拷贝·μL-1,结核杆菌为50拷贝·μL-1,两病原都存在时为100拷贝·μL-1,比常规PCR高100倍.利用所建立的二重荧光定量PCR方法及常规PCR,对24份结核痰样、11份布氏杆菌基因粗提物及30份模拟奶样进行检测,符合率为100%.本试验建立的方法可用于同时检测布氏杆菌和结核杆菌,并且具有良好的特异性、敏感性和稳定性.

关键词：布氏杆菌、结核杆菌、二重实时荧光定量PCR

所属期刊栏目：41

分类号：S852.614;S852.618(动物医学（兽医学）)

资助基金：国际合作重点项目2006DFA33740;国家自然科学基金项目30760187

在线出版日期：2010-09-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1012-1017