表达O型口蹄疫病毒P1-2A-3C基因的山羊痘病毒弱毒株的构建及筛选

摘要：

为构建和筛选表达O型口蹄疫病毒P1-2A-3C基因的山羊痘病毒弱毒株,用已构建的口蹄疫病毒O/Chi-na99毒株的EGFP-P7.5-P1-2A-3C基因整体通过平末端连接到K pn I酶切后的线性载体pUC119-TK中,得到重组载体pUC119-TK-EGFPLP7.5-P1-2A-3C.重组载体通过缺失的TK基因与羊痘病毒弱毒株在BHK-21细胞中同源重组,用EGFP作为标记筛选出重组毒株,并进行PCR鉴定、抗原捕获ELISA试验检测及Western blot分析.结果显示该重组弱毒株能在1～10代BHK-21细胞中稳定传代,扩增出约3 000 bp片段,并经测序确证为基因P1-2A-3C;抗原捕获ELISA试验检测均为阳性;Western blot分析表明转移载体pUC119-TK-EGFP-P7.5-P1-2A-3C在感染的GTPV AV41 BHK-21细胞中表达的蛋白可被O型FMDV高免血清特异性识别,并具有反应原性.这些结果表明获得了表达O型口蹄疫病毒P1-2A-3C基因的重组山羊痘弱毒株.

关键词：口蹄疫病毒、启动子P7.5、P1-2A-3C基因、羊痘病毒

所属期刊栏目：41

分类号：S852.659.6(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家科技基础条件平台项目2005DKA21205-3

在线出版日期：2010-06-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：434-440