狂犬病病毒糖蛋白膜外区表达及中和抗体间接ELISA检测方法的建立

摘要：

采用RT-PCR方法克隆了狂犬病病毒CVS株G蛋白基因编码区,进而将完整编码区和膜外区编码基因分别克隆于pET-32a,将其中含膜外区编码基因的重组质粒pET-32a-PG转化BL21(DE3),经1.0 mmol·L-1IPTG诱导,外源基因获得高效表达.通过Western-blot以及ELISA试验证明表达产物具有良好的反应原性.以纯化后的表达产物作为抗原包被酶标板,用已知中和抗体效价的OIE参考血清对该方法进行了标准化,建立了检测狂犬病病毒中和抗体的间接ELISA方法.结果表明,抗原的最佳包被量为3.74 μg,血清的最佳稀释度为1:100,待检血清阳性临界值为0.50.用此方法检测了418份血清样品,并与荧光抗体病毒中和试验(FAVN)方法进行了比较,符合率为98.61%.

关键词：狂犬病病毒、糖蛋白、膜外区表达、中和抗体、ELISA

所属期刊栏目：40

分类号：S852.659.5(动物医学（兽医学）)

资助基金：北京市科技计划:国家科技计划项目衔接一科技奥运专项Z07001000560715

在线出版日期：2009-12-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1514-1520