IGF-1毛囊特异表达载体的构建以及转染绒山羊胎儿成纤维细胞的研究

摘要：

本研究旨在构建绵羊胰岛素样生长因子1(IGF-1)毛囊特异表达载体pCDsR-KI,并转染绒山羊胎儿成纤维细胞,最终获得稳定表达红色荧光并可用于核移植的转基因细胞克隆.通过RT-PCR方法获得IGF-1 cDNA,其与KAP6-1基因启动子片段以及红色荧光蛋白表达元件连接构成IGF-1毛囊特异表达载体pCDsR-KI(大小7.4 kb).以组织块贴附法分离和培养绒山羊胎儿成纤维细胞,外源性表达载体以lipofectamineTM 2000介导转染所培养的第2代成纤维细胞,在DMEM/F12+10%FBS、37℃、5%CO2中培养,并添加G418筛选,获得了表达红色荧光蛋白的细胞克隆.经PCR法鉴定证实外源基因已经整合在细胞基因组中.通过分析转基因体细胞的生长曲线和染色体核型证明转基因细胞的生长状态良好、各项参数趋于正常.为下一步通过体细胞核移植技术获得转基因克隆绒山羊准备了核供体细胞.

关键词：绒山羊、胰岛素样生长因子1、红色荧光蛋白、毛囊细胞、胎儿成纤维细胞

所属期刊栏目：40

分类号：S827;Q78(家畜)

资助基金：国家863计划2002AA242061;内蒙古自然科学基金200607010405;内蒙古自治区高等学校科学研究项目NJ06055

在线出版日期：2009-12-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：1460-1467