山羊Sox2基因克隆、原核表达和GST融合蛋白纯化

摘要：

本研究旨在克隆山羊Sox2基因,构建pGEX-Sox2原核表达重组质粒,从大肠杆菌中获得纯化的GST-Sox2融合蛋白.应用RT-PCR方法从6周龄胎山羊生殖嵴扩增Sox2基因编码全序列,将其克隆到pMD18-T载体,然后再亚克隆到pGEX-KG表达载体.重组质粒pGEX-Sox2转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,用SDS-PAGE电泳及Western blotting检测GST-Sox2融合蛋白表达,用谷胱甘肽Sepharose 4B介质分离纯化该融合蛋白.结果表明,山羊Sox2基因编码序列全长为960 bp;在优化的表达条件(1 mmo|·L-1 IPTG,22℃诱导16h)下,重组质粒(pGEX-Sox2)在大肠杆菌得到了高效表达;谷胱甘肽Sepharose 4B颗粒纯化蛋白得到预期大小的融合蛋白(约60 ku).结论,本研究克隆了山羊Sox2基因,获得了纯化的GST-Sox2融合蛋白,为制备其多克隆抗体奠定了基础,为进一步研究山羊iPS细胞(Induced pluripotent stem cells)创造了条件.

关键词：Sox2基因、原核表达、蛋白纯化、山羊

所属期刊栏目：40

分类号：S827;Q78(家畜)

资助基金：广西自然科学基金项目桂科自0728019,桂科自0991043;广西亚热带生物资源保护利用重点实验室开放基金项目880907;广西大学科学基金项目X081102

在线出版日期：2009-12-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1454-1459