鸭瘟病毒dUTPase基因克隆、原核表达及在病毒感染宿主亚细胞中的定位分析

摘要：

根据笔者实验室新发现的鸭瘟病毒(DPV)dUTPase基因(GenBank登录号DQ486149)序列设计1对引物,PCR扩增后将产物亚克隆至pET32a(+)原核表达载体,获得表达质粒pET32a-DU.然后将其转化至E.coliBL21(DE3)进行IPTG诱导表达.SDS-PAGE检测显示诱导表达蛋白约66.8 ku,与预期表达蛋白大小一致.薄层扫描分析表明重组蛋白占菌体总蛋白的36.2%,主要以包涵体的形式存在.重组蛋白纯化后制备兔抗血清,间接ELISA效价为1:409 600.通过免疫荧光技术进行DPV dUTPase亚细胞定位检测,结果显示最早可在感染后4 h的胞质中检测到特异性荧光,12 h大量点状绿色荧光聚集于胞核;24 h后胞核内点状荧光减弱,而胞质点状荧光增强;48 h胞核和胞质荧光均显著减弱.本研究为DPV dUTPase基因功能和DPV致病机理的研究提供了重要数据.

关键词：鸭瘟病毒、dUTPase基因、克隆、表达、亚细胞定位

所属期刊栏目：39

分类号：S852.65+9.1;S858.325.3(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金项目3047129,30771598;教育部"新世纪优秀人才支持计划"项目NCET-04-0906,NCET-06-0818;高等学校科技创新工程重大项目培育资金项目706050;四川省基础研究重大项目07JY029-016;四川省重点建设学科项目SZD0418

在线出版日期：2008-10-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1087-1093