绵羊黏膜趋化因子CCL28基因的克隆、序列分析与原核表达

摘要：

利用同源序列克隆原理设计1对克隆引物,从绵羊结肠黏膜组织提取mRNA,通过RT-PCR获得CCL28基因,将PCR产物克隆、测序,并进行序列分析;再根据克隆的序列设计1对表达引物,用PCR法从重组克隆载体中扩增出含BamH Ⅰ/Xho Ⅰ酶切位点的CCL28片段,双酶切后亚克隆至pGEX-4T-1载体,构建重组原核表达载体pGEX-CCL28,转化宿主菌E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导进行表达,SDS-PAGE鉴定.克隆的绵羊CCL28基因包含完整的开放阅读框,克隆片段长444 bp,ORF为387 bp,编码129个氨基酸,与人、小鼠、猪、牛该基因的同源性分别为76.4%、61.4%、84.3%和92.9%,推测的氨基酸序列与人、小鼠、猪、牛的同源性分别为76%、63%、84%和93%,表达的融合蛋白分子量约为39 ku,并以包涵体形式存在.为下一步研究绵羊CCL28的生物学功能奠定基础.

关键词：绵羊、黏膜相关上皮趋化因子、分子克隆、序列分析、原核表达

所属期刊栏目：39

分类号：Q786;S852.4(基因工程（遗传工程）)

资助基金：河南省重点科技攻关项目0523010500

在线出版日期：2008-11-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：842-847