牛Nanog基因克隆及其在皮肤成纤维细胞中的表达

摘要：

本研究克隆了牛Nanog基因,构建其真核表达载体,并转染皮肤成纤维细胞,获得能够用作核移植供核细胞的稳定转染细胞株.从6周龄的胎牛原始生殖嵴中提取总RNA,通过RT-PCR扩增Nanog基因,将其克隆到pMD-18T载体,再从酶切鉴定和测序正确的质粒上切下目的片段,定向克隆到pCDNA3-FLAG表达载体上,挑选序列正确的真核表达质粒pCDNA3-Nanog转染牛皮肤成纤维细胞,获得了稳定转染的细胞株.用RT-PCR和Western Blotting分别检测Nanog mRNA和FLAG-Nanog融合蛋白的表达,用免疫染色法验证该细胞株是否具有干细胞特征.结果表明:(1)从胎牛原始生殖嵴中克隆了序列正确的Nanog全长编码序列;(2)所构建的pFLAG-Nanog重组质粒能够在皮肤成纤维细胞中高效表达;(3)所获稳定转染的细胞株能表达ES细胞表面抗原SSEA-4和多能性维持因子Nanog、 Oct-4,表明其具有一定的多能性.为进一步研究Nanog基因功能,尤其是探讨它在家畜早期胚胎发育、生产转基因动物,以及胚胎干细胞建系中的作用奠定了基础.

关键词：牛、Nanog、分子克隆、真核表达

所属期刊栏目：39

分类号：S823.2(家畜)

资助基金：科技部"863"项目2005AA219050;教育部重大项目03160;陕西省重点项目2006kz05-G1

在线出版日期：2008-09-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：547-554