鸡胚精原细胞体外转染EGFP方法的比较

摘要：

以增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)为报告基因体外转染鸡胚胎精原细胞(Chicken embryonic spermatogonial cells,CESCs),比较磷酸钙、脂质体(梭华-Sofast)、电穿孔3种方法转染EGFP的效率,以获得高效的体外转染方法.本研究分离孵化16 d的鸡胚睾丸,获取CESCs,体外培养和传代扩增,传至第2代后进行碱性磷酸酶(AKP)活性和阶段特异性表面抗原-1(Stage specific embryonic antigen-1,SSEA-1)免疫荧光鉴定.运用磷酸钙、脂质体(梭华-Sofast)、电穿孔3种方法体外转染第2代CESCs,荧光细胞计数法分析转染效率.结果表明:与磷酸钙法、脂质体法相比,电穿孔法可获得更高的细胞成活率和转染率(68%vs39%、65%,19.70%vs2.92%、9.73%),差异显著(P<0.05).因此得出,电穿孔法是将外源基因导入鸡胚精原细胞的适宜方法.

关键词：鸡、精原细胞、增强型绿色荧光蛋白、体外转染

所属期刊栏目：39

分类号：S814.8(普通畜牧学)

资助基金：国家自然科学基金30371031

在线出版日期：2008-05-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：164-169