柔嫩艾美耳球虫子孢子cDNA表达文库的构建

摘要：

在无RNase污染的环境下,提取柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)子孢子RNA,进而纯化mRNA,采用Oligo(dT)引物反转录合成cDNA第一链和第二链,并在其两端加EcoR Ⅰ/Hind Ⅲ定向接头.将所产生的cDNA分子定向克隆到具有EcoR Ⅰ/Hind Ⅲ黏性末端的λSCREEN载体的两臂之间.用PhageMaker extract对以上连接产物进行体外包装,形成完整的噬菌体,并用该噬菌体转染大肠杆菌ER1647,进行文库容量测定和扩增.以扩增文库的DNA为模板,利用已知基因引物克隆E. tenella 3-1E基因,并进行测序.结果表明,成功构建了E. tenella孢子化卵囊子孢子的cDNA文库,文库原始库容量约为4×106 pfu/mL,插入片段约100～3 000 bp,扩增得到特定的E. tenella 3-1E基因,说明文库质量高、代表性强,为进一步从文库中筛选相关基因提供了有效的工具.

关键词：柔嫩艾美耳球虫、孢子化卵囊、子孢子、cDNA表达文库、构建

所属期刊栏目：38

分类号：S852.72+3;Q785(动物医学（兽医学）)

资助基金：科技部社会公益研究项目2001DIA10006

在线出版日期：2007-11-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：999-1002