猪β-干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及其活性

摘要：

为了高效表达分泌型的猪β-干扰素,将去除信号肽的编码梅山猪β-干扰素成熟多肽基因(mPoIFNβ)插入酵母-大肠杆菌穿梭载体pPIC9K,构建成分泌型重组表达载体pPIC9K-mPoIFNβ.将以SalⅠ线性化的pPIC9K-mPoIFNβ用化学方法(LiCl),与鲑鱼精DNA(ssDNA)共转化入毕赤酵母菌株GS115,转化子经MD平板筛选和PCR鉴定后获得阳性菌株,再经高浓度G418筛选到多拷贝菌株.以1%甲醇连续诱导4 d,SDS-PAGE和Western blot检测结果表明:表达产物为22 ku和26 ku的混合物,在GS115中的表达量约为80 mg/L,占分泌型总蛋白的29.4%～30.8%,表明猪β-干扰素基因在毕赤酵母中获得了高效分泌表达.对表达产物进行理化分析发现,重组酵母菌表达的蛋白耐酸(pH2),对热(56℃)部分敏感,并能被特异性的抗猪β-干扰素抗体中和而不与抗猪γ-干扰素抗体反应.以细胞病变抑制法(CPE50)测定干扰素抗病毒活性,在MDBK(牛肾细胞系)中表达的猪β-干扰素的抗VSV比活性达到2.0×106 U/mg;对口蹄疫病毒在IBRS-2细胞中的增殖也有明显的抑制作用.

关键词：猪β-干扰素、毕赤酵母、分泌表达、抗病毒活性、口蹄疫病毒

所属期刊栏目：38

分类号：S852.4(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2002AA245071;湖北省科技攻关项目2004AA202B01

在线出版日期：2007-07-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：506-512